Development and validation of a standard area diagram set to assess powdery mildew severity on watermelon leaves / Desenvolvimento e validação de uma escala diagramática para avaliar a severidade oídio em folhas de melancia do

ABSTRACT: The development and validation of a standard area diagram set (SADs) was proposed in this study to assess the severity of powdery mildew (Podosphaera xanthii) in watermelon (Citrullus lanatus) leaves. The SADs proposed has twelve levels of severity, varying from 0.07 to 100%. The SADs were validated by 16 raters who had no previous experience in evaluating plant disease severity. Initially, the estimation of severity was performed without the use of the SADs in leaves with different levels of severity. In a second moment, the same raters estimated the disease severity using the SADs proposed. By Lin's concordance correlation analysis, there was an improvement in precision (coefficient of correlation, r = 0.878 and r = 0.959, without and with SADs, respectively) and accuracy (bias correction factor, Cb = 0.830 and 0.982, without and with SADs, respectively) using SADs when compared to the non-use of SADs. The agreement (Lin's concordance correlation coefficient, ρc = 0.734 and 0.952 without and with SADs, respectively) also improved using SADs. Severity estimates inter-rater were more reliable when using SADs (coefficient of determination, R2 = 0.681 without and R2 = 0.864 with SADs; Intra-class correlation coefficient, ρ = 0.759 and ρ = 0.928, without and with SADs, respectively). Therefore, SADs improved precision, accuracy and reliability of powdery mildew severity on watermelon leaves.

RESUMO: Neste estudo foi proposto o desenvolvimento e validação de uma escala diagramática (ED) para avaliar a severidade do oídio (Podosphaera xanthii) em folhas de melancia (Citrullus lanatus). A ED proposta possui 12 níveis de severidade, variando de 0,07 a 100%. A ED foi validada por 16 avaliadores inexperientes em avaliação de severidade de doenças de plantas. Inicialmente, as estimativas de severidade foram realizadas sem o uso da ED em folhas com diferentes níveis de severidade. No segundo momento, os mesmos avaliadores estimaram a severidade da doença usando a ED proposta. Pela análise da correlação concordante de Lin, houve melhoria na precisão (coeficiente de correlação, r = 0,787 e r = 0,959, sem e com o uso da ED, respectivamente) e acurácia (fator de correção do desvio, Cb = 0,830 e 0,982, sem e com o uso da ED, respectivamente) usando a ED quando comparado ao não uso da ED. O coeficiente de correlação concordante de Lin, ρc = 0,734 e 0,952 sem e com o uso da ED, respectivamente) também melhorou com o uso da ED. As estimativas de severidade tiveram melhoria na reprodutibilidade quando a ED foi usada (coeficiente de determinação, R2=0,681 e R2 = 0,864 sem e com o uso da ED, respectivamente; coeficiente de correlação intra-classe, ρ = 0,759 e ρ = 0,928, sem e com o uso da ED, respectivamente). Portanto, a ED melhorou a precisão, acurácia e reprodutibilidade das estimativas de severidade do oídio em folhas de melancia.

Factors affecting the production and regeneration of protoplasts from Colletotrichum lindemuthianum / Fatores que afetam a produção e regeneração de protoplastos de Colletotrichum lindemuthianum

The present work reports factors affecting the production and regeneration of protoplasts from Colletotrichum lindemuthianum. The usefulness of protoplast isolation is relevant for many different applications and has been principally used in procedures involving genetic manipulation. Osmotic stabilizers, lytic enzymes, incubation time and mycelial age were evaluated in terms of their effects on protoplast yield. The optimal condition for protoplast production included the incubation of young mycelia (48 h) in 0.6 mol l-1 NaCl as the osmotic stabilizer, with 30 mg ml-1 Lysing Enzymes from Trichoderma harzianum for 3 h of incubation. In these conditions protoplasts production was higher than 10(6) protoplatos ml-1 in the digestion mixture, number suitable enough for experiments of transformation in fungi. Sucrose concentrations of 1.2 mol l-1 and 1 mol l-1 were the most suitable osmotic stabilizers for the regeneration after 48 h, with rates of 16.35 percent and 14.54 percent, respectively. This study produced an efficient method for protoplast production and reverted them into a typical mycelial morphology using a Colletotrichum lindemuthianum LV115 isolate.

O presente trabalho apresenta os fatores que afetam a produção e regeneração de protoplastos de Colletotrichum lindemuthianum. O isolamento de protoplastos é muito relevante para diferentes aplicações, principalmente, em procedimentos que envolvem a manipulação genética. Estabilizadores osmóticos, enzimas líticas, tempo de incubação e idade micelial foram testados com relação ao efeito na liberação de protoplastos. As condições otimizadas para produção de protoplastos foram incubação de micélio jovem (48 h) em estabilizador osmótico NaCl 0.6 mol l-1, acrescido de 30 mg ml-1 da enzima Lysing Enzymes de Trichoderma harzianum incubado, durante 3 h. Nessas condições, a obtenção de protoplastos foi maior que 10(6) protoplatos ml-1 na mistura de digestão, número suficientemente adequado para experimentos de transformação em fungos. Sacarose nas concentrações de 1.2 mol l-1 e 1 mol l-1 foram os estabilizadores mais apropriados para a regeneração, após 48 h, sendo as taxas de regeneração de 16.35 por cento e 14.54 por cento, respectivamente. Este estudo produziu um método eficiente para produção e reversão de protoplastos à morfologia micelial típica de Colletotrichum lindemuthianum utilizando o isolado LV115.